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D-氨甲酰水解酶的突变体及其应用

时间：2008-8-28 文字大小：【大】【中】【小】

　　β-内酰胺类抗生素是临床控制细菌感染的首选药物之一。D-对羟基苯甘氨酸（DHPG）是合成该类药物的一种重要中间体。DHPG的制备在工业上有化学合成法和酶法两种方法，化学合成法成本高，污染大；而酶法成本较低、无污染。酶法的技术原理是：用D-乙内酰脲酶将DL-对羟基苯海因不对称水解成N-氨甲酰基-D-对羟基苯甘氨酸，然后在N-氨甲酰-D-氨基酸水解酶（也称为D-氨甲酰水解酶，简称DCase）的作用下，将N-氨甲酰基-D-对羟基苯甘氨酸不可逆水解转变成DHPG。
　　
　　本项目通过定向进化技术对目的基因进行随机突变，并用高通量筛选方法，获得可溶性表达提高的D-氨甲酰水解酶突变体。相比于野生型DCase，本发明4个突变体的酶活分别提高1.0、1.5、4.7和8.4倍；可溶性表达分别是野生酶的1.3、1.4、1.9、3.2倍，显示出在DHPG生产中的潜在应用价值。
　　
　　本项目已申请中国专利（申请号：200610023147.8）。